慢性缺氧诱导肾小管上皮细胞HIF-1α/p53通路在肾脏纤维化中的作用

慢性缺氧是导致慢性肾脏病肾脏纤维化发生的重要原因，但其分子体机制尚不清楚。西京医院的刘立敏教授对此进行了研究，且于2016年血液净化论坛进行了相关议题的演讲。现对其研究总结如下：

研究方法：

生物信息学检测：p53基因启动子区存在HIF-1α潜在的结合位点序列。缺氧诱导肾小管上皮细胞，PCR检测HIF-1α/p53的表达丰度。采用EMSA和ChIp实验明确p53与下游靶基因CyclinB1，CKD1的结合作用。进一步采用HIF-1αsiRNA、P53激动剂/抑制剂处理缺氧诱导的肾小管上皮细胞，利用qRT-PCR、Westernblotting、免疫组化和免疫荧光方法检测细胞周期相关蛋白的变化，流式细胞术检测缺氧诱导的肾小管上皮细胞，分析G2/M期细胞比例的变化，检测促纤维化因子TGF-β、α-SMA、FN、COL1A1、COL3A1基因和蛋白的变化。构建小鼠UUO肾间质纤维化模型，采用HIF-1αsiRNA、P53激动剂/抑制剂处理UUO动物模型，观察其对肾组织病理、肾功能、小管损伤，细胞周期相关基因与蛋白、促纤维化基因与蛋白表达的变化。

研究结果：

通过缺氧可体外诱导肾小管上皮细胞HIF-1α/p53通路的活化，从而导致细胞外基质沉积增加，胶原合成增加，促进肾脏纤维化。并且在缺氧性肾病组织中HIF-1α/p53表达增加，与纤维化程度呈正相关性。生物信息学预测：P53基因启动子区存在HIF-1α潜在的结合位点序列。报告基因和ChIP实验证实：HIF-1α直接转录激活P53的表达。采用EMSA和ChIp实验明确P53与下游靶基因CyclinB1，CKD1的结合作用。缺氧诱导的肾小管上皮细胞和UUO模型中HIF-1α/p53与CyclinB1，CKD1的表达成正相关。与我们推测，缺氧后HIF-1α/p53高表达，进通过CyclinB1，CKD1参与细胞周期G2/M期阻滞，导致细胞不能有效分裂，引起促纤维化因子的产生增加，促进了肾脏纤维化。

研究结论：

缺氧可以激活HIF-1α/p53高表达，将通过CyclinB1，CKD1参与细胞周期G2/M期阻滞，促进了肾脏纤维化，这一机制揭示，为阐明缺氧性肾损伤机制和肾脏纤维化提供全新视角，为探讨新的治疗手段提供重要线索。