2-甲氧基雌二醇对恶性黑素瘤B16细胞株增殖与凋亡的影响

2017-05-25 来源：中华皮肤科杂志标签：掌上医生喝茶减肥一天瘦一斤安全减肥 cps联盟美容护肤

摘要：2-ME在体外能够抑制小鼠恶性黑素瘤B16细胞的增殖，能够使c-myc基因的表达降低，使gadd45b基因的表达升高。

　　由于肿瘤细胞多药耐药性的产生，恶性黑素瘤对达卡巴嗪、替莫唑胺等多种化疗药物可产生耐药性，多种化疗方案治疗均不理想。2-甲氧基雌二醇（2-ME）是人体内17-β雌二醇的代谢产物，体外研究发现，其具有潜在的抗多种肿瘤的活性，包括乳腺癌、子宫内膜癌、多发性骨髓瘤、白血病等。但关于2-ME对黑素瘤的研究国内尚未见报道。胡彩霞等观察2-ME对黑素瘤细胞增殖与凋亡的影响，为该药物的临床应用提供实验基础。

　　目的探讨2-ME对小鼠恶性黑素瘤B16细胞增殖与凋亡的影响，并初步探讨其机制。

　　方法选用小鼠B16细胞进行体外培养，实验分为阴性对照组和药物处理组，药物处理组加入2-ME，使其终浓度分别为5、10、20、40μmol/L，阴性对照组不加2-ME。作用不同时间后，倒置相差显微镜下观察细胞形态变化；根据磺酰罗丹明B方法测得的各组A490值绘制生长曲线；采用磺酰罗丹明B法检测黑素瘤细胞活性；流式细胞仪检测细胞周期及凋亡；逆转录PCR和实时PCR法分析凋亡诱导基因（gadd45b）及原癌基因（c-myc）的表达情况。

　　结果重复测量方差分析显示，5、10、20、40μmol/L的2-ME作用于黑素瘤细胞不同时间后对其增殖的抑制作用差异有统计学意义（F=1170.94，P<0.01）；上述浓度的2-ME作用24、48、72h对黑素瘤细胞增殖的抑制作用差异亦有统计学意义（F=1843.04，P<0.01）；药物浓度和培养时间存在交互作用（F=272.79，P<0.01）。10、20、40μmol/L2-ME作用48h后，B16细胞的凋亡率分别上升至（4.13±1.12）%、（11.25±2.38）%、（19.46±2.9）%，与阴性对照组［（0.23±0.5）%］相比，差异均有统计学意义（P<0.01）；细胞出现G0/G1期阻滞，对照组细胞、10、20、40μmol/L2-ME处理组细胞G0/G1期比例分别为（44.1±3.4）%、（59.5±5.6）%、（63.4±8.2）%、（70.8±4.4）%，且随着浓度的增加，G0/G1期细胞明显增加，各处理组及对照组间比较，G0/G1期细胞比例差异有统计学意义（F=13.56，P<0.05）。与阴性对照组相比，20μmol/L和40μmol/L2-ME作用24h可升高gadd45b的表达（均P<0.01），10、20、40μmol/L2-ME均可降低c-myc基因的表达，差异均有统计学意义（均P<0.05）。

　　结论2-ME在体外能够抑制小鼠恶性黑素瘤B16细胞的增殖，能够使c-myc基因的表达降低，使gadd45b基因的表达升高。