中波紫外线对角质形成细胞NF-κB p65及其抑制因子IκBα表达的影响

　　皮肤老化和皮肤癌等的发生与日光紫外线的照射密切相关，其中，中波紫外线（UVB）是损伤表皮角质形成细胞、诱发皮肤癌的主要环境因子。NF-κB在保持正常表皮结构、功能和正常角质形成细胞的动态平衡中起着重要作用，且NF-κB通路与炎症反应、凋亡调控、老化等密切相关。IκBα为NF-κB的抑制因子，静息状态下两者以二聚体形式存在于胞质中而呈无活性状态，当细胞受到某些外界刺激时，IKKβ作为IκB激酶可使IκB磷酸化而降解。丁兰等通过比较不同剂量UVB照射角质形成细胞（细胞系及原代细胞）及高剂量照射原代角质形成细胞后的不同时间点细胞总蛋白NF-κBp65、IκBα、IKKβ及相关磷酸化IKKα/β（ser176/180）、磷酸化IκBα（ser32）、磷酸化NF-κBp65（ser536）的表达，初步探讨UVB照射对角质形成细胞NF-κBp65信号的调控效应。

　　目的探讨不同剂量UVB照射对体外培养的人皮肤角质形成细胞NF-κBp65及其抑制因子IκBα表达的调控效应。

　　方法4.5、10及50mJ/cm2UVB照射人角质形成细胞系及人原代角质形成细胞，设置未经照射的对照组，在照射后4h使用Western印迹法测定细胞总蛋白中IκBα及NF-κBp65的表达水平。并对人原代角质形成细胞进行50mJ/cm2UVB照射，照射后继续培养2、4、8、12h，分别测定4个时间点IκBα及NF-κBp65的表达水平。蛋白条带密度分析使用QuantityOne?4.6.8软件，分别计算IKKβ、IκBα、NF-κBp65以及磷酸化IKKα/β、IκBα、NF-κBp65和β肌动蛋白条带吸光度和面积的乘积，再分别计算IKKβ、IκBα和NF-κBp65与β肌动蛋白的比值，取3次实验结果。

　　结果4.5和10mJ/cm2UVB照射后4h，相对于对照组细胞，人角质形成细胞系及人原代角质形成细胞总蛋白中IKKβ、IκBα、NF-κBp65表达水平均无明显变化（P>0.05）；50mJ/cm2UVB照射后4h，细胞系及原代角质形成细胞中IKKβ表达水平均无明显变化（P>0.05）；原代角质形成细胞IκBα表达水平（0.173&plusmn;0.055）较对照组细胞（0.462±0.142）显著降低（t=5.64，P<0.05），NF-κBp65表达水平（0.076±0.030）也较对照组细胞（0.120±0.034）降低（t=5.40，P<0.05）；角质形成细胞IκBα表达水平（0.160±0.046）较对照组细胞（0.398±0.136）轻度下调（t=4.37，P<0.05），NF-κBp65的表达水平无明显变化（P>0.05）。50mJ/cm2UVB照射原代角质形成细胞后2h，IκBα表达水平（0.140±0.034）相对于对照组细胞（0.208±0.031）开始下调（t=17.55，P<0.05），并随照射后时间延长下调效应更为显著；NF-κBp65的表达水平在2h和4h时较对照细胞无明显变化（P>0.05），8h时（1.162±0.345）较对照细胞（1.235±0.349）表达水平下调（t=36.67，P<0.05），12h时（1.061±0.246）较对照细胞（1.390±0.226）仍下调（t=28.71，P<0.05），随着时间的推进下调效应无明显改变；磷酸化IKKα/β（ser176/180）、IKKβ、磷酸化IκBα（ser32）、磷酸化NF-κBp65（ser536）表达量均无明显改变（P>0.05）。

　　结论高剂量（50mJ/cm2）UVB照射可显著抑制人原代角质形成细胞IκBα表达，同时轻度抑制NF-κBp65蛋白的表达，提示可能存在UVB照射人原代角质形成细胞引起NF-κBp65活化的另一种通路。

　　综上所述，UVB对角质形成细胞NF-κB信号活化的可能机制之一，是UVB从总蛋白水平显著抑制了角质形成细胞的IκBα（NF-κB抑制因子）表达，造成IκBα对NF-κBp65抑制功能明显削弱，最终导致NF-κB信号活化。本研究虽然丰富了我们对UVB调控角质形成细胞NF-κB通路机制的认识，然而NF-κB通路本身具有非常复杂的调控级联和信号调节方式，仍然需要很多的工作对其进行深入研究。