目的探讨瘢痕疙瘩中成纤维细胞p16基因甲基化在其发生发展中的作用。
方法分离、培养来自瘢痕疙瘩皮损和健康人皮肤原代成纤维细胞;免疫组化法检测瘢痕疙瘩皮损中p16表达情况;实时荧光定量PCR检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16、DNA甲基转移酶mRNA表达;亚硫酸氢盐修饰后测序(BSP法)检测瘢痕疙瘩皮损及培养的原代成纤维细胞p16基因甲基化状态。
结果瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16基因mRNA表达低于健康人皮肤成纤维细胞(相对表达量2-△△Ct分别为0.64±0.18和1.92±0.23,t=10.54,P<0.05)。瘢痕疙瘩成纤维细胞三种DNA甲基转移酶(DNMT)基因mRNA表达水平(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B分别为2.58±0.23、4.87±0.46、1.57±0.12)与健康人皮肤成纤维细胞(分别为1.13±0.21、2.38±0.32、0.57±0.16)相比均存在高表达,两组比较,t值分别为11.22、10.81、12.45,均P<0.05。瘢痕疙瘩组织和瘢痕疙瘩原代成纤维细胞内p16启动子区甲基化程度分别为1.81%±0.46%和3.15%±0.94%,明显高于健康人皮肤组织(0.90%±0.35%,F=14.23,P<0.01)和原代成纤维细胞(0.17%±0.29%,F=37.62,P<0.01)。
结论瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16基因甲基化及其低表达与瘢痕疙瘩的失控性生长可能相关,DNA甲基转移酶在其发病中可能起一定作用。
前期研究表明,KFb在细胞增殖及DNA合成代谢等多个方面均明显高于NFb;细胞周期检测表明,KFb存在G2/M期阻滞。p16基因又名多肿瘤抑制基因1(MTS1),其基因编码产物P16蛋白可通过与细胞周期依赖性激酶(CDK)4结合而使其失活,从而阻止细胞由G1期进入S期,抑制细胞的过度增殖。p16基因启动子区域的高甲基化使基因沉默,P16蛋白不能表达。本研究发现,瘢痕疙瘩皮损及其成纤维细胞p16基因低表达,其启动区CpG岛中存在甲基化现象,但甲基化程度与肿瘤细胞相比还存在较大差异。
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