喜树碱对HaCaT细胞低氧诱导因子1α表达的影响

　　目的观察喜树碱对低氧（2%O2）培养下HaCaT细胞低氧诱导因子1α（HIF-1α）表达的影响，探讨外用喜树碱治疗银屑病可能的作用机制。

　　方法将HaCaT细胞分为实验组和溶媒组（对照组），实验组为喜树碱+DMEM培养液，终浓度分别为12.5、25、50、100、200nmol/L；溶媒组为含二甲基亚砜（DMSO）的DMEM培养液。不同浓度的喜树碱作用于HaCaT细胞12、24、48、72h，CCK8法检测细胞增殖；用以上浓度处理低氧诱导12h的HaCaT细胞，Western印迹检测细胞HIF-1α蛋白的表达。将HaCaT细胞分为常氧组和低氧组，每组内再分喜树碱干预组（100nmol/L）和非干预组（溶媒对照组），培养12h后实时荧光定量PCR检测HIF-1αmRNA的相对表达。统计分析采用SPSS16.0软件进行Levene′stest、单因素方差分析、Dunnett-t检验和析因分析。

　　结果不同浓度喜树碱作用12、24、48、72h后对HaCaT细胞的增殖有抑制作用，呈浓度和时间依赖关系；200nmol/L喜树碱作用12h，100、200nmol/L喜树碱作用24h细胞增殖抑制率分别为（17.66&plusmn;6.46）%、（33.11±4.63）%、（56.31±1.69）%，与同时段溶媒对照组间差异有统计学意义（均P<0.05）。低氧诱导12h，25、50、100、200nmol/L喜树碱处理后HIF-1α蛋白表达分别为0.348±0.065、0.261±0.112、0.115±0.043、0.045±0.024，与溶媒组（1.445±0.329）比较，差异有统计学意义（均P<0.05）。喜树碱干预（100nmol/L）与非干预的HIF-1αmRNA表达（△Ct值）分别为：常氧组-5.575±0.29、-5.451±0.21；低氧组-6.543±0.57、-6.203±0.31；低氧较常氧条件下HaCaT细胞HIF-1αmRNA的表达下调，差异有统计学意义（F=29.856，P<0.05）；喜树碱干预和非干预组间HaCaT细胞HIF-1αmRNA的表达在常氧和低氧条件下差异无统计学意义（F=1.667，P>0.05）。

　　结论100nmol/L喜树碱可抑制HaCaT细胞HIF-1α蛋白表达，对HIF-1αmRNA的表达水平无明显影响。

　　讨论

　　HIF-1是一种氧依赖转录活因子，是细胞在缺氧条件下产生的转录活性核蛋白，其活性形式为HIF-1α。研究表明，银屑病皮损组织中HIF-1α的表达相对于特应性皮炎、脂溢性皮炎或正常皮肤组织均明显增加，并可调控与银屑病皮损真皮乳头层血管增生相关的多种靶基因表达。

　　本实验中，25~200nmol/L喜树碱作用12~72h均对HaCaT细胞的增殖有明显的抑制作用，这种抑制作用呈浓度和时间依赖关系。12.5~200nmol/L喜树碱处理低氧诱导12h的HaCaT细胞，随着喜树碱浓度增加，对HIF-1α蛋白表达抑制作用也增强。提示低浓度喜树碱可抑制HaCaT细胞增殖，抑制HIF-1α蛋白表达的药物浓度较增殖抑制浓度低。

　　本实验低氧诱导12h的HaCaT细胞HIF-1αmRNA表达较常氧组降低，该现象可能与细胞急性缺氧有关。100nmol/L浓度喜树碱作用低氧诱导的HaCaT细胞12h，细胞中HIF-1α蛋白表达被明显抑制，但HIF-1αmRNA在喜树碱干预前后的表达差异无统计学意义。提示喜树碱可能是在转录后水平调节HIF-1α的表达。