卡马拉素对HaCaT细胞体外增殖及对白细胞介素17C、CCL20、NF-κB表达的影响

　　卡马拉素是从植物中提取的一种多酚类化合物，在古印度药典中可作为外用药治疗疥疮、疱疹性皮肤病，具有抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和调节多种炎症性细胞因子表达的作用，并能强烈抑制NF-κB的表达。在银屑病皮损中，白细胞介素17C及趋化因子CCL20（CCL20）均呈高表达状态，CCL20通过与表达于Th17细胞表面的特异性配体CCR6结合，促进Th17细胞向皮损区定向趋化。

　　目的

　　探讨卡马拉素对HaCaT细胞体外增殖及对白细胞介素17C（IL-17C）、趋化因子CCL20、NF-κB表达的影响。

　　方法

　　用不同浓度卡马拉素组（0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L）、含与4.0μmol/L卡马拉素等体积二甲基亚砜的RPMI1640培养液（溶媒组）、RPMI1640培养液（对照组）分别作用于HaCaT细胞。采用CCK8法检测卡马拉素作用于HaCaT细胞24、48、72h对细胞体外增殖的影响；RT-PCR法检测卡马拉素对HaCaT细胞IL-17C和CCL20mRNA表达的影响；Western印迹法检测卡马拉素对HaCaT细胞IL-17C、CCL20和NF-κB蛋白表达的影响。统计学处理采用重复测量的方差分析、单因素方差分析和Pearson相关分析。

　　结果

　　各浓度组卡马拉素对HaCaT细胞增殖的抑制作用有随时间变化的趋势（F=126.936，P<0.05），药物作用时间越长，抑制作用越强；HaCaT细胞增殖的抑制率也随卡马拉素浓度的增加而升高（F=838.308，P<0.05）；不同浓度卡马拉素组对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用随时间变化的趋势不同，药物浓度与时间存在交互作用（F=15.961，P<0.05）。不同浓度卡马拉素作用于HaCaT细胞48h后，IL-17CmRNA及其蛋白、CCL20mRNA及其蛋白、NF-κB蛋白表达量均随卡马拉素浓度的增加而不断降低，差异均有统计学意义（F值分别为206.041、233.887、143.883、162.431、577.915，均P<0.05）。

　　结论

　　卡马拉素可抑制HaCaT细胞的体外增殖，并可在mRNA和蛋白水平下调IL-17C、CCL20的表达，而两者表达量的降低可能与NF-κB表达下调有关。

　　讨论

　　本研究结果显示，不同浓度卡马拉素对HaCaT细胞体外增殖均具有显著抑制作用，对HaCaT细胞NF-κB的表达也具有显著抑制作用，还可显著下调HaCaT细胞IL-17C和CCL20mRNA和蛋白的表达。相关性分析发现，NF-κB的下调与IL-17C、CCL20的表达量减弱呈显著正相关。推测卡马拉素可以抑制NF-κB信号通路的活化，阻断NF-κB向细胞核内的转移，从而阻止NF-κB的活化片段与核内IL-17C启动子的结合，使得IL-17C的表达量下降。另外，卡马拉素通过下调CCL20在KC的表达，减弱了发病关键性Th17细胞的定向趋化，进而减少了多种Th17细胞相关的致病性细胞因子的表达及与其他细胞之间的相互作用，阻断这种趋化细胞-细胞因子-KC之间形成的反馈性通路，也可能是其发挥疾病治疗作用的一种机制。