自杀基因治疗胰腺癌的研究

　　近年来，肿瘤基因治疗已成为恶性肿瘤治疗研究的热点之一。其中自身基因治疗作为基因治疗中一种重要的方法，已显示了广阔的前景。

　　胰腺癌的自杀基因治疗

　　1. CD/5-FC自杀基因：1993年Huber等报道了大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase，CD）基因的DNA序列，同年他们报道了5-FU对体内、体外有CD基因导入的人结肠癌细胞杀伤性研究数据，结果表明，CD基因可望在恶性肿瘤基因治疗上取得疗效。5-FU仍为目前胰腺癌首选的化疗药物。潘雪等应用细菌内同源重组法构建含大肠杆菌CD基因的腺病毒载体，经293细胞包装、扩增，氯化铯密度梯度离心制备纯化CD腺病毒液，体外转染人胰腺癌细胞，并给予前药5-FU，观察其体外杀伤效果；并建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型，瘤内直接注入CD腺病毒液，随后腹腔内注入5-FU，观察CD基因的原位治疗效应。含CD基因腺病毒载体经酶切鉴定正确，包装纯化后，检测病毒滴度为2×1011pfu/ml，将重组腺病毒转染胰腺癌细胞株后，可见5-FC对转导入CD基因的胰腺癌细胞有明显细胞毒性作用，而对未导入CD基因的人胰腺癌细胞毒性较低，体内实验显示CD基因原位转导对裸鼠胰腺癌疗效较明显。腺病毒介导CD基因，不仅转染效果强，而且加用5-FC后，可直接或通过旁观者效应杀伤胰腺癌细胞或抑制移植瘤的生长，可作为胰腺癌基因治疗的有效方法。

　　2. HSV-TK/GCV自杀基因：HSV-TK/GCV系统在多种肿瘤中的研究已见实验报道，且已用于脑胶质瘤的临床治疗。王静等通过脂质体介导的基因转移方法将含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（herpes simplex virus thymidine kinase gene，HSV-TK）的复制缺陷型逆转录病毒载体GINaTK导入包装细胞PA317，然后利用细胞产生的假病毒颗粒感染人胰腺癌细胞系SW1990细胞。在SW1990/TK细胞培养物中加入抗病毒前药GCV，观察GCV对该细胞的杀伤作用及旁观者效应。实验表明GCV对SW1990/TK有显著的抑制剂杀灭作用，同时表现出强烈的旁观者效应。

　　3. CD/UPRT自杀基因：CD/5-FU系统是目前研究最多的自杀基因系统，由于CD基因在肿瘤细胞内的不稳定性，常降低该系统的疗效。张世能等采用同源重组技术构建重组腺病毒Ad-CD、Ad-CD/UPRT和Ad-GFP；体外感染人胰腺癌SW1990细胞，RT-PCR检测UPRT mRNA表达；MTT法检测细胞对5-FC的敏感性及旁观者效应；流式细胞仪分析细胞凋亡率；建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型，瘤体内直接注射腺病毒，观察CD/UPRT自杀基因的原位治疗作用。结果显示：转染CD/UPRT的胰腺癌SW1990细胞对5-FC的敏感性明显提高，Ad-CD/UPRT组的IC50为25μmol/L，而Ad-CD组和Ad-GFP组分别为100μmol/L和＞1000μmol/L。Ad-CD组和Ad-CD/UPRT组合Ad-GFP组的细胞凋亡率分别为61.3%、40.5%和3.0%，3组比较有显著差异（P<0.05）。CD/UPRT基因转染存在旁观者效应。Ad-GFP治疗肿瘤缩小63%。结果表明CD/UPRT自杀基因系统能提高对胰腺癌细胞的杀伤作用。

　　结论

　　综上所述，胰腺癌的自杀基因治疗已经取得了肿大进展，有着广阔的前景，但目前的成果尚局限于动物实验阶段，要想进一步应用于临床治疗，还有许多问题尚待解决。虽然从基础实验过度到临床应用仍有一段距离，相信随着基础研究的不断深入，基因治疗在胰腺癌的治疗中应能够发挥更大的作用，必将会成为一种有效的胰腺癌辅助治疗手段。

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