破解TWEAK及其受体机制，为肝纤维化的治疗提供新思路

2018-03-29 来源：临床肝胆病杂志标签：掌上医生喝茶减肥一天瘦一斤安全减肥 cps联盟美容护肤

摘要：肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子（TWEAK）是一个Ⅱ型跨膜蛋白，是肿瘤坏死因子超家族的成员之一，Fn14是目前发现的TWEAK唯一的受体，TWEAK/Fn14信号通路在促炎、血管再生以及调节细胞生长、发育、凋亡等过程中都发挥着广泛的作用。

破解TWEAK及其受体机制，为肝纤维化的治疗提供新思路

TWEAK/Fn14在一些肝损伤模型中可起到促进作用，故而可能促进肝纤维化的进程，但该通路在肝纤维化过程中的具体作用机制，尤其是在活化HSC的迁徙方面的作用尚不清楚。

正常情况下，HSC位于Disse腔内，胞浆中有含类视黄醇物质的脂滴，当各种病理因素作用下HSC由静止状态被激活，活化的HSC发生细胞形态、增殖、代谢和功能的变化，同时细胞的迁徙特性也增加。HSC迁徙是肝纤维化形成过程中所必须的，HSC迁徙缺陷时，在致纤维化因素下很少发生肝纤维化。HSC的迁徙能力增加导致炎症区域活化的HSC数目显著增多，直接参与损伤修复。

同时活化的HSC也向肝内更广泛的区域移行，加速ECM沉积，从而导致损伤区域的扩散，促进肝纤维化的发生和发展。本研究通过加入TWEAK及干扰TWEAK受体Fn14的方法验证了TWEAK/Fn14信号通路能增加LX-2细胞迁徙能力。增强HSC迁徙能力的分子机制目前尚不清楚，既往研究报道与细胞形态、骨架结构和细胞因子等多种因素相关。

MMP9属于基质金属蛋白酶家族中的一员，以无活性的酶原形式从细胞内分泌到细胞外，经过一系列的酶联反应被激活而发挥生物学作用。在肝纤维化中，MMP9被发现与肝损伤及炎症反应程度存在相关性，在非酒精性脂肪性肝病及丙型肝炎患者中尤为明显。

有研究显示MMP9与HSC迁徙密切相关，MMP9被激活后发挥蛋白水解作用降解胶原成分，从而促进HSC迁徙；同时MMP9还能激活TGFβ，后者作为经典的促肝纤维化细胞因子，不仅具有强大的促进HSC增殖的能力，还能大大增强HSC的迁徙能力。

本研究结果发现，TWEAK/Fn14通路可以上调MMP9的表达水平，其表达量随着TWEAK作用时间延长而增加，且下调Fn14后再加入TWEAK处理，MMP9的表达量下降，因此TWEAK/Fn14信号通路增强HSC的迁徙能力，考虑是由于升高MMP9的水平导致。并且由于TWEAK促炎作用是促进肝纤维化进程的基础。

real-timePCR检测干扰Fn14基因后mRNA水平的表达变化。结果显示，3条干扰序列都能降低Fn14mRNA的表达水平，其中第2条序列的干扰效果最好，下降（0.163±0.001）倍。同时蛋白水平也显示第2条序列的干扰效果最佳，所以选择第2条序列进行后续实验

分别检测加入TWEAK后0、3、6、12及24h，MMP9的mRNA及蛋白表达水平变化情况。结果显示，加入TWEAK后MMP9的mRNA水平明显升高，其中3h升高（1.27±0.25）倍，6h升高（2.37±0.25）倍,12h升高（5.02±0.22）倍,24h升高（8.55±0.03）倍。同时MMP9蛋白水平也随着TWEAK作用时间延长表达量逐渐增加

将阴性对照及转染过Fn14siRNA的LX-2细胞分别加入TWEAK处理，检测MMP9的mRNA及蛋白水平表达变化情况。结果显示，si#2+TWEAK组MMP9的mRNA表达量较阴性对照+TWEAK组降低，下降（0.81±0.04）倍。同时si#2+TWEAK组MMP9蛋白水平也较阴性对照+TWEAK组降低