循环miRNA动态监测或可作为甲状腺乳头状癌诊断及预后指标

　　循环miRNA动态监测或可作为甲状腺乳头状癌诊断及预后指标

　　甲状腺乳头状癌（PTC）的发病率呈逐年上升趋势，虽然其5年生存率超过95%，但需要终身随访，且有近三成患者在10年或20年后出现复发或转移。因此，PTC的诊断、治疗手段及随访策略需要不断更新。

　　作为一线检查的甲状腺超声诊断PTC的灵敏度较低，而细针穿刺抽吸活检（FNAC）由于取样有限以及辨识困难，诊断的不确定性高达30%左右，一些小分子标记物受到多种原因限制，如费用昂贵、灵敏度特异度不高等，没有得到广泛的临床应用。故临床亟需高特异度、灵敏度、非侵入性的检查来辅助PTC的诊断、随访监测及预后判断。

　　微小RNA（miRNA）是内源性的非编码RNA，已被证实在基因表达中发挥重要调节作用，在肿瘤发生发展中的地位亦逐渐受到重视。miRNA在组织、体液均有表达，一些miRNA（miR-222，miR-221和miR-146b）在PTC组织中的表达量高于正常甲状腺组织及甲状腺良性结节（BTN），提示miRNA的表达变化或可作为PTC的诊断及预后指标。

　　然而，目前的研究多局限于甲状腺组织中的miRNA，血液循环中miRNA的研究仍十分缺乏。因此，来自中国哈尔滨医科大学的研究团队进行了一项关于PTC患者血清miRNA动态变化的研究，其研究成果发表在2017年6月的OncologyLetters上。

　　研究设计

　　研究共纳入2013年9月至2015年12月哈尔滨医科大学附属第二医院内接受治疗的106名PTC患者（85例新诊断PTC，21例疑似PTC），35例BTN患者，以及来自体检中心的40例对照患者。所有患者的手术治疗均符合修订版ATA指南规范。

　　用逆转录-荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）来检测血清中miRNA表达量，以miR-16作为内参对照。

　　研究结果

　　1.PTC、BTN及对照患者血清中miR-16水平无明显差异。

　　为了探究miRNA是否可以作为内参，研究者们用cel-miR-39作为外参对照，发现各组间外参表达量无明显差异，继而以外参为标准将miR-16标准化，发现PTC、BTN及对照患者血清中miR-16表达水平无明显差异（图1）。因此，miR-16可以作为各组检测血清中miRNA的内参。

　　.PTC、BTN及对照患者血清中cel-miR-39和miR-16表达情况

　　2.PTC患者与BTN患者及对照组相比，其血清中miR-222、miR-221、miR-146b表达量均显著增高。

　　BTN患者血清中miR-221表达量高于对照，其他两个指标与对照组无显著差异（图2）。

　　PTC患者与对照组相比，使用以上三个指标共同作为诊断的敏感度和特异度分别为72.94%和94.29%，而单独作为诊断指标的敏感度和特异度分别为miR-222：74.12%和90%，miR-221：83.53%和87.5%，miR-146b：69.41%和97.5%。

　　PTC患者与BTN相比，使用以上三个指标共同作为诊断的敏感度和特异度分别为80%和97.5%，而单独作为诊断指标的敏感度和特异度分别为miR-222：62.86%和88.24%，miR-221：85.71%和52.94%，miR-146b：94.29%和68.24%（图3）。

　　.PTC、BTN及对照组血清miR-222（A）、miR-221（B）、miR-146b（C）的表达

     　.PTC患者与对照组及BTN患者比较，使用三种不同miRNA作为区分标准的特异度和敏感度

　　3.血清中三种miRNA增高的患者有一定的临床病理学特征。

　　通过分析比较发现，伴有甲状腺外侵犯的、肿瘤TNM分期较高的、高风险的患者、淋巴结有转移的以及双侧甲状腺肿瘤的患者中，这三种miRNA表达量增高显著，提示其可能与PTC预后相关。

　　4.PTC和BTN患者术前及术后血清中三种miRNA表达量动态变化情况。

　　通过动态监测血清中miRNA表达量变化情况可以看到，PTC患者术后1个月与术前相比，其血清中miR-222、miR-221及miR-146b均显著降低，术后6个月与术后3个月相比也显著降低。

　　而在BTN患者中，仅有miR-146b表达量在术后1个月与术前相比发生了显著降低，但是在术后3个月又显著上升

　　行甲状腺次全切除术和甲状腺全切患者血清中三种miRNA表达量变化无显著差异

　　.PTC和BTN患者术前及术后1、3、6、12个月时血清中miR-222、miR-221和miR-146b表达量变化

　　.甲状腺次全切除及甲状腺全切患者血清中miR-222、miR-221和miR-146b表达量的动态变化

　　5.PTC复发情况与miRNA表达量的关系。

　　21例曾因PTC而行甲状腺手术的患者，因有检查疑似复发而被纳入研究。最终手术结果证实其中12例为复发，而9例未复发。复发患者血清中miR-222、miR-221和miR-146b表达量均显著高于未复发组和阴性对照组。此外，未复发组患者miR-221和miR-146b表达量均高于阴性对照组（图6）。

　　.PTC复发、未复发及阴性对照患者血清中miR-222、miR-221和miR-146b表达量

　　作者观点

　　本研究提示，PTC患者术前血清中miR-222、miR-221及miR-146b表达量显著高于BTN患者及对照患者，并且有较高的敏感度和特异度。这三种miRNA表达量高还与PTC预后较差相关，包括甲状腺外侵犯、淋巴结转移、高风险及肿瘤分期高等。在手术后，这三种miRNA的表达量均显著下降，且在复发患者中显著高于未复发患者。

　　综上所述，动态监测循环miRNA变化情况可能可以作为PTC诊断、术后进展及预后判断的一种非侵入性检查指标，有助于进一步加强PTC管理，规范治疗，提高患者生活质量。