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流感病毒小知识及一种快速测定流感疫苗效价的方法

2018-05-02 来源:颇尔ForteBio  标签: 掌上医生 喝茶减肥 一天瘦一斤 安全减肥 cps联盟 美容护肤
摘要:流感病毒属正粘液病毒科,流感病毒属,包括甲、乙、丙三型,甲型抗原变异性最强,感染人类和其他动物,引起中、重度疾病,侵袭所有年龄组人群,常引起世界性大流行。

每年5、6月份都是流感的高发期,可能不少小宝宝又要打流感疫苗了。这期陈老湿就介绍一下流感病毒的小知识……

流感病毒结构:

RNA:核酸(RNA)位于它的中心,成为核心或基因组;

Lipidmembrane:脂质膜,病毒外有脂质膜构成包膜;

Hemagglutinin(H):血球凝集素,是一种糖蛋白,存在于病毒表面,通过多糖上的α2,3-唾液酸糖或者α2,6-唾液酸将流感病毒结合在细胞表面发挥作用。目前已知的血球凝集素有18种抗原亚型(H1-H18);

Neuraminidase(N):神经氨酸酶,亦称唾液酸苷酶,是分布于流感病毒被膜上的一种糖蛋白,它具有抗原性,可以催化唾液酸水解,协助成熟流感病毒脱离宿主细胞感染新的细胞,有11个亚型(N1-N11)。

流感病毒种类

流感病毒属正粘液病毒科,流感病毒属,包括甲、乙、丙三型,甲型抗原变异性最强,感染人类和其他动物,引起中、重度疾病,侵袭所有年龄组人群,常引起世界性大流行。乙型变异性较弱,仅感染人类,一般引起轻微的疾病,主要侵袭儿童,可引起局部爆发。丙型抗原性比较稳定,仅引起婴幼儿感染和成人散发病例。

甲型流感病毒根据H和N抗原不同,又分为许多亚型,H可分为18个亚型(H1~H18),N有9个亚型(N1~N11)。其中仅H1N1、H2N2、H3N2主要感染人类,其它许多亚型的自然宿主是多种禽类和动物。

流感命名

1980年,WHO公布了流感病毒新的统一命名法。甲型流感病毒的命名内容和顺序是:型别/宿主/分离地点/毒株编号/分离年代(血凝素抗原亚型和神经氨酸酶抗原亚型)。乙型和丙型流感病毒的命名法与甲型相同,但由于没有H和N亚型的划分,故不加注明。

流感病毒命名规则

1.型别:流感病毒根据其核蛋白的抗原性可以分为三型:甲型流感病毒,又称A型流感病毒、乙型流感病毒,又称B型流感病毒、丙型流感病毒,又称C型流感病毒

2.寄主来源:流感病毒的自然宿主包括人及禽类、猪、马等

3.分离地区:表明病毒被分离的地区名称

4.毒株序号:指采样时的标本编号

5.分离年份:表明病毒被分离时的年份

6.HnNn:为亚型信息,根据其表面抗原血凝素(H)和神经氨酸酶(N)抗原性不同,分为若干亚型。

例如:A/California/04/2009/(H1N1)即核蛋白为甲型、2009年在加利福尼亚分离到的以人类为宿主的H1N1亚型流感病毒毒株,毒株序号为04。

流感疫苗与检测

流感疫苗主要分为裂解疫苗,灭活全病毒疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗等,都保留主要由HA,NA蛋白等抗原引起的免疫原性。

对于季节性和流行性流感病毒,一个关键的策略是接种疫苗。由于病毒存在两种变异形式----抗原性转变和抗原性漂移,全球每年都不得不调整流感疫苗构成。但是目前流感疫苗效力检测方法是单向疫苗扩散方法和红细胞凝集实验,不仅时间长,而且实验操作难,重复性差,限制了新疫苗的开发。所以非常需要有一种方法可以快速的检测流感疫苗的效力或者浓度。这种方法就是BLI(生物膜干涉)技术!有两篇文章,用BLI技术分别对流感VLP疫苗(病毒样颗粒)和灭活疫苗的效力进行了检测。

1)固化α2,3-唾液酸糖或者α2,6-唾液酸糖在链霉亲和素传感器上(唾液酸糖是流感病毒的受体,这步可以预先固化好)

2)用样品的基质平衡,比如在培养基中,就用培养基平衡,时间2min

3)结合含有分析物的样品,生成分析物时间结合曲线,时间在5分钟

4)分析:根据结合分析曲线的斜率计算样品中浓度

备注:分析物需要加入达菲作为NA的抑制剂,否则会降解固化在传感器上的糖。

检测的灵敏度(文章1)

检测不同亚型流感病毒疫苗的检测限(LOD)和定量(LOQ)限如下图所示:

而这个灵敏度完全可以满足不同生产环节中流感疫苗的浓度测定。

BLI在疫苗各生产步骤中的效力检测结果与红细胞凝集实验比较(文章1)

流感疫苗的各个生产阶段,每个形状代表在这个阶段的样品

因为凝集实验本身误差比较大,所以在黑色线内,认为两种方法的结果没有明显差别,可见,BLI技术在各个生产阶段的流感疫苗效力的检测结果与红细胞凝集实验的相关性比较好。

BLI检测结果与SRID比较结果(文章2)

SRID(单向免疫扩散)方法被认为是目前通过的检测流感疫苗效价的金标准。虽然它有各种缺点,但还是要比比的。由美国FDA的生物制品评价和研究部门发表的文章2中,将针对流感病毒的抗体固化在anti-mouseIgG传感器上,检测疫苗的效力。

在BLI上用4种抗体(5A6,98,1E9,7B5)检测两种疫苗(vaccine1,vaccine2),与SRID比较。

vaccine1的BLI检测的结果为238μg/ml到260μg/ml,而SRID检测结果为248ug/ml。可见,两种方法的结果一致。

两篇文章都对生物膜干涉技术的评价很高,充分肯定了生物膜干涉技术的灵敏度和检测速度,而且强调BLI非常适合流感疫苗在各个生产环节中的粗的或者纯样品的效力检测。当然,BLI技术不仅可以用于流感疫苗,所有生物制品的不同生产阶段的样品都可以用BLI技术进行快速检测,市面上新的浓度测定方法很多,但是像BLI技术这样同时具备高灵敏度,便宜,快速与良好重复性以及高通量等优点的浓度测定技术有几个呢?

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