B 型流感嗜血杆菌疫苗的研究进展

　　目前预防Hib感染的主要应对措施是接种疫苗，随着Hib疫苗使用的不断扩大，Hib疾病得到了很好的控制，很多国家Hib的发生率都明显降低。据世界卫生组织(WHO)统计数据，全球5岁以下死亡儿童中，2009年因为Hib导致的死亡人数占死亡总人数的3%-4%，到2012年降为2%。

　　Hib致病毒力主要是其荚膜多糖—多聚核糖基核糖醇磷酸盐(PRP)，PRP具有抗原性，能在人体中诱发保护性免疫力，但是PRP是一种非胸腺依赖性抗原，虽然可以产生较弱的IgM抗体，但不产生免疫记忆，对18个月龄以下的婴儿，其B淋巴细胞尚未熟，不足以产生自我保护能力。为使机体获得更高的免疫效应，PRP需要结合到一种载体蛋白上，使PRP成为胸腺依赖性抗原，这样其免疫机体后能对机体产生高效而又长久的保护力。

　　到2013年为止全球已有186个国家引入Hib疫苗，但Hib接种覆盖率仅为52%。我国虽早已引入Hib疫苗，但到目前为止尚未将Hib疫苗纳入国家计划免疫范围内。以下为Hib疫苗的发展历程及展望。

　　Hib多糖疫苗

　　1970年因为Hib荚膜多糖PRP能使机体产生免疫应答反应使Hib疫苗开始得到发展。1985年美国和芬兰首次以提纯的多糖PRP制备的Hib荚膜多糖疫苗用于儿童免疫，因其产生的免疫保护性差，所以1988年停止使用。基于之前的动物实验和一些经典的Hib-PRP多糖疫苗的临床试验表明，体内最低抗PRP抗体水平浓度为0.05-0.15μg/ml，在这个抗体水平下，机体将获得对Hib疾病的保护力。研究表明，当人体内抗PRP抗体水平≥0.15μg/ml时，可对机体产生短期免疫保护，当初次免疫抗体水平≥1μg/ml，并且12个月后抗体水平最低维持在0.1μg/ml，将对机体产生长期保护。

　　在对50000名芬兰婴儿和3-60个月龄的儿童进行Hib-PRP多糖疫苗免疫临床试验研究中表明，Hib-PRP疫苗在对Hib疾病的保护力上并不明显，差异无统计学意义；在对北美18000名2-72个月龄的孩子进行类似试验研究也得出类似的结果，由此可见单独的Hib多糖疫苗并不能对机体产生良好的保护效果。

　　现有Hib结合疫苗

　　1987年第1代多糖结合疫苗研制成功，Hib荚膜多糖与白喉类毒素D蛋白结合(PRP-D)疫苗，开启了结合疫苗的新时代。1990年后陆续有4种结合疫苗相继研制成功。一个好的结合疫苗应该包括以下几点：

　　①化学组成和结构清楚；

　　②生产过程中其物理和化学性质稳定；

　　③临床安全无内在毒性；

　　④能够诱导机体产生高水平抗体或者调理素；

　　⑤诱导产生相应的免疫记忆。

　　目前市场上的Hib主要由以下4种蛋白作为载体而合成的结合疫苗：白喉类毒素（DT）、破伤风类毒素（TT）、无毒白喉类毒素变异体（CRM197）和脑膜炎球菌外膜蛋白复合体（OMP）。虽然以这些蛋白为载体的结合疫苗都具有较好的免疫原性，但是他们具有不同的免疫学特性，因此，在体内反应速度、产生抗体浓度、亲合力和接种后个体基因型的不同而存在差异。

　　研究表明，即使在3次加强免疫后，PRP-D所产生的抗体应答效应也是最低的。在另一个双盲实验中，随机对照实验比较4种疫苗的免疫原性和反应原性，4种疫苗分别在婴儿2、4和6个月龄时各免疫1次，共免疫3次，结果显示4种不同的PRP结合疫苗的抗体水平如下：PRP-D(0.28μg/ml)、PRP-OMP(1.14μg/ml)、PRP-CRM197(3.08μg/ml)、PRP-T(3.64μg/ml)，表明PRP-D所产生的抗体水平仍然是最低的。在免疫婴儿中PRP-D产生抗体浓度≥1μg/ml，在所免疫的婴儿中占29%。而另外3种疫苗分别为PRP-OMP为55%、PRP-CRM197为75%、PRP-T为83%。由此可见PRP-D对婴儿不能产生较好的保护效果，即使在3剂加强免疫后,抗体水平≥1μg/ml的比例也仅有48%。

　　PRP-CRM197在单剂免疫2个月龄的婴儿后就能刺激机体产生最高的抗体浓度。在一项对阿拉斯加本土4个月龄婴儿进行4种疫苗的比较试验中，PRP-CRM197结合疫苗产生抗PRP抗体水平大于0.15μg/ml，为91%，产生抗体浓度大于1μg/ml，为57%。虽然PRP-CRM197在随后4个月、6个月的加强免疫中，所产生的抗体水平比较缓慢，但是在一些Hib高发的地方(阿拉斯加州,澳大利亚土著居民等)，因其初次免疫就产生大量抗体，这样就可以间接减少接种次数，降低经济负担，因此受到人们的喜欢。

　　一项研究比较了3种不同的Hib结合疫苗，结果显示，PRP-CRM197结合疫苗所产生抗体亲合力比PRP-OMP高，而PRP-T所产生的平均抗体亲合度低于PRP-CRM197，但是高于PRP-OMP。在不同的疫苗中最高抗体亲合力是最低抗体亲和力的7倍。在另外一项对大鼠的研究中，PRP-CRM197的杀菌效果和保护力度是PRP-OMP的10倍。相对于其他结合疫苗，PRP-T在对婴儿进行3剂加强免疫后所产生的抗体水平是最高的，维持时间也最长。

　　新型Hib结合疫苗

　　2010年有研究者研制出一种新型Hib结合疫苗(PRP-T)结合疫苗LBVH0101(韩国LGLifeSciences公司)，它是通过化学合成法合成的天然PRP多聚物与破伤风类毒素蛋白结合的新型疫苗，并且经试验证明安全性和免疫原性较好。运用随机双盲实验比较新型PRP-T结合疫苗LBVH0101和葛兰素史克(GSK)生产的PRP-T疫苗的免疫原性。对韩国185名婴儿在出生后2、4、6个月分别接种两种疫苗，12-15个月加强免疫1次后比较血清中抗体浓度和杀菌活性。其中接种LBVH0101疫苗第2次和第3次免疫后抗体浓度≥1μg/ml的比例分别为90.32%和100%，而GSK分别为78.26%和96.74%。在第2次接种LBVH0101后抗体平均水平为7.34μg/ml，GSK为3.55μg/ml。第3次接种LBVH0101后抗体平均水平为14.59μg/ml，GSK为12.15μg/ml。在第2和第3次接种后LBVH0101杀菌活性分别为35.05和116.27，GSK分别为53.76和79.64。并且该新型疫苗安全性良好，具有很好的运用前景。