siRNA干扰水通道蛋白3和磷脂酶D2表达对A431细胞株生长和凋亡的影响

　　水通道蛋白（AQP）是一类介导水分子跨膜运动的转运蛋白的总称，其中AQP3是皮肤中含量最丰富的主要AQP。研究表明，AQP3能促进人角质形成细胞增殖和促进皮肤肿瘤发生。磷脂酶D（PLD）是一类脂肪分解酶，其在一些肿瘤的发生、分化、凋亡及转移等过程中起着极其重要的作用。AQP3和PLD2在皮肤肿瘤中异常表达，与细胞增殖有关，且两者在功能上密切相关，具有协同作用。王小勇等通过RNA干扰技术，阻断AQP3和PLD2的表达，观察转染后人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431细胞增殖和凋亡的变化。

　　目的探讨水通道蛋白3（AQP3）和磷脂酶D2（PLD2）在人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431细胞增殖和凋亡中的作用。

　　方法针对AQP3和PLD2各设计3条siRNA，用脂质体转染法将siRNA导入A431细胞。用荧光定量PCR方法筛选出其中干扰效果最佳的AQP3-siRNA和PLD2-siRNA，Western印迹法检测转染后AQP3和PLD2蛋白的表达水平。将A431细胞分为5组：正常培养组（不加任何处理），转染试剂组（加入转染试剂），阴性对照组（转染阴性对照siRNA），AQP3-siRNA组（转染AQP3-siRNA），PLD2-siRNA组（转染PLD2-siRNA）。CCK8法检测AQP3和PLD2表达下调对A431细胞增殖的影响，膜联蛋白-V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡。

　　结果用脂质体转染法将siRNA导入A431细胞后，AQP3和PLD2的mRNA和蛋白表达均较阴性对照组明显下降。与阴性对照组比较，转染AQP3-siRNA后A431细胞增殖在24、48、72h均受到明显抑制（t值分别为24.10、11.00、9.54，均P<0.01）；转染PLD2-siRNA后，A431细胞增殖同样在24、48、72h均受到明显抑制（t值分别为30.47、7.02、8.73，均P<0.01）。与阴性对照组比较，转染AQP3-siRNA后，A431细胞凋亡在48h和72h均明显增加（t值分别为11.36、20.91，均P<0.01）；转染PLD2-siRNA后，A431细胞凋亡在72h明显增加（t值为4.86，P<0.05）。

　　结论siRNA下调AQP3或PLD2表达可抑制A431细胞增殖，诱导A431细胞凋亡。

　　在肿瘤治疗中，诱导肿瘤细胞凋亡是一种重要的治疗手段。本研究用siRNA干扰AQP3和PLD2的表达可诱导A431细胞凋亡，表明其在鳞状细胞癌治疗中可能发挥作用。AQP3和PLD2在结构及功能上密切相关。两者同时分布在角质形成细胞膜上的富含小窝蛋白（caveolin）的区域，且作为一个整体，AQP3/PLD2信号分子相互作用，共同调节着角质形成细胞的分化。