组织蛋白酶B在急性光损伤皮肤成纤维细胞中的表达及意义

　　组织蛋白酶B（CatB）参与细胞迁移、增殖及凋亡等的调节，同时在细胞外基质重塑中也起到重要作用，参与皮肤损伤修复及瘢痕形成。研究发现，组织蛋白酶等其他的酶也参与皮肤光老化发生。在光老化的皮肤及细胞模型中，CatB的表达均已被证实发生改变。但在急性光损伤中CatB的变化还鲜见报道。为进一步探索CatB在光损伤中的作用，侯巍等通过观察长波紫外线（UVA）照射导致皮肤成纤维细胞急性光损伤后CatB表达的变化，研究该变化在时间上的规律及与UVA剂量之间的关系。

　　目的探讨组织蛋白酶B（CatB）在急性光损伤人皮肤成纤维细胞（HDF）中的表达变化及意义。

　　方法体外培养原代HDF，选取第4~8代细胞进行实验。实验设长波紫外线（UVA）照射组和不照射的对照组。CCK8法分别检测5、10、15、20和25J/cm2UVA照射后HDF的增殖率。用10J/cm2UVA单次照射致HDF急性光损伤，Western印迹及实时定量逆转录（RT）-PCR分别检测急性光损伤组HDF及对照组HDF照射后24、48、72hCatB蛋白及mRNA表达；另外分别用10、15、20、25J/cm2UVA照射HDF，Western印迹及实时定量RT-PCR分别检测急性光损伤组及对照组HDF照射后48hCatB蛋白及基因表达。数据采用SPSS13.0统计软件行方差分析，两组间比较采用最小显著差异法（LSD）。

　　结果UVA照射导致HDF增殖率下降；当UVA剂量≤10J/cm2时，细胞存活率均保持在85%以上，各照光组分别与对照组24、48、72h时比较，均P<0.05。Western印迹结果显示，急性光损伤组（10J/cm2UVA照射）CatB蛋白灰度值在照射后24h（0.76&plusmn;0.14）、48h（1.34±0.38）、72h（0.82±0.09）均较对照组（分别为0.35±0.01、0.45±0.12、0.61±0.06）升高（均P<0.05）。实时定量RT-PCR显示，在急性光损伤组CatB的mRNA表达在照射后24h（0.149±0.009）、48h（0.173±0.009）、72h（0.185±0.158）也较对照组（分别为0.089±0.015、0.091±0.010、0.111±0.017）上调（均P<0.05）。10、15、20、25J/cm2UVA照射HDF后48h，CatB的蛋白灰度值分别为0.99±0.07、1.49±0.14、1.89±0.08、2.07±0.06，均较对照组（0.60±0.05）升高（均P<0.05），CatB的mRNA表达也较对照组升高。

　　结论UVA致急性光损伤的皮肤成纤维细胞中CatB蛋白及mRNA表达均上调。

　　在急性光损伤中，UVA可能通过提高转录、增加CatB释放等途径提高CatB表达水平，上调的CatB则通过其具有的胶原降解、蛋白水解能力参与光损伤的发生。CatB还可清除金属蛋白酶组织抑制剂-1、2，当CatB表达上调时，其清除作用也增强，进而导致MMP激活，加剧光损伤。还有研究表明，CatB可导致尿激酶纤溶酶原激活物和组织型纤溶酶原激活物释放，激活纤溶酶，促发蛋白水解级联反应，从而进一步促发光损伤。