携人乳头瘤病毒6型全基因细胞的组织工程皮片培养的初步研究

　　目的建立人乳头瘤病毒6型（HPV6）全基因体外组织工程皮片培养模型，为进一步研究HPV病毒周期奠定基础。

　　方法用电转的方法，将HPV6全长线性基因和质粒pEGFP-▲EGFP共转染hTERT细胞，G418抗性筛选，Southern印迹法检测细胞内HPV病毒含量；3T3J2滋养层细胞、I型鼠尾胶原与含HPV6基因的hTERT细胞（HPV6.hTERT细胞）混合后，在金属网格上共同培养，逐渐形成皮片样结构。HE染色和免疫组化检测皮片的组织结构和HPV6L1蛋白表达，电镜检查皮片病毒颗粒。

　　结果HPV6全长线性基因成功转入hTERT细胞，Southern印迹法检测细胞内含HPV6DNA；与3T3J2细胞、I型鼠尾胶原共同培养的HPV6.hTERT细胞随时间而增殖分化，逐渐形成具有疣状增生外观的皮片。皮片HE染色显示，培养7d即出现典型的皮肤分层结构；培养21d皮片可见明显乳头瘤样增生、空泡细胞、角化过度、角化不全等HPV感染组织病理表现。免疫组化显示皮片上部有HPV6L1蛋白表达。电镜检测发现皮片中存在HPV6病毒颗粒。

　　结论HPV6全基因组织工程皮片培养模型为HPV的生物学研究提供了一个平台，但在应用上有一定的局限性。