目的克隆、表达梅毒螺旋体重组蛋白Tp0844,纯化表达产物并进行免疫反应性分析,筛选与宿主具有高反应性的Tp主要蛋白。
方法通过生物信息学分析,获取Tp0844基因序列,构建原核载体进行诱导表达;Ni-NTA亲合层析柱纯化重组蛋白,Western印迹法检测其重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况。
结果成功构建PET-30a(+)-Tp0844原核表达重组体,经诱导表达后发现该重组体可高表达出可溶性的重组蛋白,经亲和层析纯化后获得了相对分子质量为43000的重组蛋白;以梅毒IgG抗体阴、阳性血清为一抗,采用Western印迹法检测发现,Tp0844重组蛋白与梅毒阳性血清能发生明显特异反应,而与健康阴性血清未出现反应条带。
结论可溶性重组表达的Tp0844蛋白具有较好的免疫反应性,可作为梅毒发病机制研究的候选抗原。
讨论
作为有望在梅毒致病过程中发挥重要作用的蛋白一般需要满足两个条件:首先,必须能早期接触机体,在感染早期即能在血液里检测到其相应的抗体;其次要求蛋白含量较高、免疫原性强。进行Tp发表机制的研究首先须从筛选蛋白入手。Tp0844基因全长1050bp,编码350个氨基酸、相对分子质量约为43000,整个分子的抗原性较强,存在多个强抗原表位,可以作为梅毒发病机制研究的候选抗原。本文结果显示,成功获得高纯度、可溶性表达的重组蛋白Tp0844重组蛋白,其能与梅毒感染阳性血清发生反应,而与梅毒阴性血清未发生反应,证明Tp0844重组蛋白具有良好的免疫反应性,为下一步研究其在梅毒发病中的作用,如黏附、穿透、播散及诱导宿主炎症反应作用,完整解析Tp0844的生物学功能及进行梅毒早期诊断方法学研究奠定了基础。
免疫调节。
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