C型凝集素受体Langerin的细胞表达模型构建及功能研究

　　目的构建朗格汉斯细胞特异性C型凝集素受体Langerin体外细胞表达模型。

　　方法PCR方法获得Langerin分子的cDNA，克隆入真核绿色荧光蛋白（EGFP）表达载体pEGFP-C1（EGFP位于Langerin的N末端），转染人肾胚细胞癌HEK293T细胞后，激光共聚焦显微镜检测EGFP-Langerin融合蛋白的细胞表达情况，流式细胞仪检测Langerin受体的表达，并进一步检测转染表达的Langerin受体对尘螨抗原（nDerp2）的识别和内吞情况。

　　结果构建的荧光融合蛋白重组表达质粒转染HEK293T细胞后，经PCR及Western印迹检测证明Langerin转染及表达成功。重组表达质粒转染HEK293T细胞后，经流式细胞仪检测转染Langerin融合质粒的HEK293T细胞的Langerin受体表达率较转染前增多约43%，经激光共聚焦显微镜检测显示绿色荧光标记的Langerin成功表达，并可与红色荧光素标记的尘螨抗原（nDerp2）结合，将nDerp2内吞入细胞内。

　　结论构建的EGFP-Langerin融合蛋白在HEK293T细胞内表达后具有细胞表面受体分子的特征性分布，具有结合、内吞过敏原功能。

　　讨论

　　C型凝集素受体是包括朗格汉斯细胞在内的树突细胞表面重要的模式识别受体，其中Langerin是朗格汉斯细胞表面特异性的C型凝集素受体，因其表达的特异性以及抗原提呈、抵抗HIV感染等功能的多样性受到研究者们的关注。我们将EGFP置于Langerin的N末端，构建荧光融合蛋白重组表达质粒，并经PCR及Western印迹验证Langerin表达成功。经重组质粒转染HEK293T细胞后，共聚焦显微镜发现Langerin表达率增加40%以上，且主要为膜表达。荧光标记的过敏原抗原经过不同孵育时间与Langerin受体结合的情况，进一步证实Langerin的细胞膜表面分布特征以及具有识别、结合、内吞富含糖基结构的功能。