外周血单一核细胞的体外活化对成纤维细胞增殖和基质金属蛋白酶产生的影响

2017-05-18 来源：中华皮肤科杂志标签：掌上医生喝茶减肥一天瘦一斤安全减肥 cps联盟美容护肤

摘要：PBMC活化后可表达MMP-1mRNA并分泌MMP-3蛋白，PBMC活化后上清液不能刺激成纤维细胞MMP-1、MMP-3、MMP-9mRNA及蛋白表达，提示炎症细胞可能通过自身产生MMP而发挥作用。

　　目的

　　研究不同活化剂对外周血单一核细胞（PBMC）产生基质金属蛋白酶（MMP）的影响以及PBMC活化后培养上清液［称为条件培养基（CM）］对培养的皮肤成纤维细胞增殖活性、产生MMP的影响。

　　方法

　　抽取、分离健康人PBMC，分为植物血凝素（PHA）组、双抗体组、对照组，分别用活化剂PHA、CD3和CD28双抗体、含10%胎牛血清的RPMI1640培养基处理细胞，72h后收集三组CM，并将获得的CM按不同比例稀释后作用于培养的成纤维细胞，以不加CM作为对照组，培养48或24h。采用噻唑蓝法检测细胞增殖能力，半定量逆转录（RT）-PCR法检测细胞MMP-1、MMP-3、MMP-9mRNA表达水平，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清液中白介素（IL）-6、MMP-1、MMP-3、MMP-9蛋白含量。

　　结果

　　与对照组相比，PHA组PBMC增殖活性及分泌IL-6、MMP-3水平明显增加，差异均有统计学意义（P<0.05）；3组活化后上清液中均未检测到MMP-1、MMP-9蛋白。对照组、双抗体组、PHA组PBMC中MMP-1mRNA相对表达水平0.083±0.016、0.188±0.030、0.714±0.104，差异有统计学意义（P<0.05），MMP-3、MMP-9mRNA均无表达。不同稀释度CM刺激成纤维细胞后上清液中可检测到MMP-3蛋白，MMP-3含量以原液CM中最高，1/10CM刺激时最低；在相同的稀释度刺激时，上清液中MMP-3含量以PHA刺激组最高，对照刺激组最低；不同CM刺激成纤维细胞后上清液中均未检测到MMP-1、MMP-9蛋白。不同处理组成纤维细胞的增殖能力及MMP-1、MMP-3mRNA表达差异均无统计学意义（P>0.05），MMP-9mRNA无表达。

　　结论

　　PBMC活化后可表达MMP-1mRNA并分泌MMP-3蛋白，PBMC活化后上清液不能刺激成纤维细胞MMP-1、MMP-3、MMP-9mRNA及蛋白表达，提示炎症细胞可能通过自身产生MMP而发挥作用。