转染白细胞介素2基因能增强CIK细胞对恶性黑素瘤的杀伤力吗？

　　近年来，肿瘤过继免疫治疗成为生物治疗中最活跃的研究领域，如白细胞介素2/淋巴因子激活杀伤细胞（IL-2/LAK）、CD3AK细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）、自然杀伤细胞（NK细胞）、树突细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）等，在临床上已成功用于治疗多种恶性肿瘤。但同时又发现许多问题，如治疗恶性黑素瘤时IL-2剂量过大、CIK细胞低效、简单联合效果差等，导致临床应用受到极大限制。

　　芦兰等通过将IL-2基因转染至CIK细胞来增强CIK细胞毒性，观察其对荷瘤鼠的抑瘤和促细胞凋亡作用，探讨IL-2基因转染CIK细胞对恶性黑素瘤的杀伤能力。

　　白细胞介素2基因转染细胞因子诱导的杀伤细胞对恶性黑素瘤细胞的杀伤作用

　　芦兰谢丛华张浩中许绿叶师幸伟谢君车彪丁雯

　　作者单位：武汉大学中南医院肿瘤放化疗科（芦兰、谢丛华）；长江航运总医院内科（张浩中、许绿叶、师幸伟、丁雯），外科（谢君、车彪）

　　提取小鼠脾细胞，分离淋巴细胞，培养CIK细胞，用携带IL-2的质粒PEGF-N1-IL-2转染CIK细胞，荧光显微镜观察质粒转染情况，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）鉴定IL-2基因的表达。将效应细胞（CIK细胞或IL-2转染CIK细胞）和靶细胞（B16黑素瘤细胞）分别按照效靶比10∶1、20∶1和40∶1混合培养，采用4h乳酸脱氢酶释放测定法，检测CIK细胞对B16细胞的细胞毒活性。按照效靶比40∶1混合，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测两种CIK细胞IL-2、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。建立小鼠黑素瘤模型，将28只模型小鼠平均分为4组：对照组（瘤旁注射0.2ml生理氯化钠溶液）、IL-2组（瘤旁注射100IUIL-2）、CIK组（瘤旁注射细胞数约1×106CIK细胞悬液）、IL-2转染CIK组（瘤旁注射细胞数约1×106IL-2转染CIK细胞悬液），通过肿瘤形态学和抑瘤率、细胞凋亡率来评价荷瘤小鼠肿瘤生长情况。

　　四组荷瘤小鼠干预治疗前后肿瘤形态变化干预治疗前，4组荷瘤小鼠背部皮下肿瘤结节大小近乎一致；干预治疗9d后，对照组肿瘤变大，其他3组肿瘤变小，IL-2转染CIK组肿瘤变小最明显。IL-2：白细胞介素2；CIK：细胞因子诱导的杀伤细胞

　　荧光显微镜及RT-PCR均显示IL-2转染CIK细胞成功。效靶比实验显示，40∶1时IL-2转染CIK细胞对B16细胞的毒性最强，IL-2转染CIK细胞组分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α的能力明显高于CIK细胞组，两组间比较，t值分别为442.60、14.93和6.89，差异均有统计学意义（均P<0.01）。动物实验显示，与干预前相比，干预后对照组小鼠肿瘤体积明显增大（P<0.05），而IL-2组、CIK组和IL-2转染CIK组小鼠肿瘤体积明显减小（均P<0.001），且IL-2转染CIK组肿瘤体积显著小于其他3组（均P<0.01），但IL-2组和CIK组差异无统计学意义（P>0.05）。CIK组、IL-2组和IL-2转染CIK组的细胞凋亡率均显著大于对照组（均P<0.01），IL-2转染CIK组的细胞凋亡率及抑瘤率均显著大于IL-2组和CIK组（均P<0.01），而IL-2组和CIK组细胞凋亡率及抑瘤率差异均无统计学意义（均P>0.05）。

　　IL-2转染CIK细胞可被成功构建，效靶比40∶1时IL-2转染CIK细胞对恶性黑素瘤细胞的毒性最强，且IL-2转染的CIK细胞能分泌更多的IL-2、IFN-γ和TNF-α，促进CIK细胞成熟，增强其肿瘤杀伤能力。