AGE对光损伤皮肤成纤维细胞的CatD有影响吗？

　　晚期糖基化终末产物（advancedglycationendproducts，AGE）是指蛋白质、脂类、核酸等大分子物质的游离氨基与还原糖发生缓慢非酶糖化反应，最终形成结构稳定、不易降解的大分子棕色产物。AGE与衰老、氧化应激密切相关。新近研究发现，AGE在光老化皮肤中堆积，并在光老化中起重要作用。组织蛋白酶D（cathepsinD，CatD）是降解AGE的重要蛋白酶之一，在光老化皮肤及皮肤成纤维细胞中表达降低，机制未明。许新雅等对比检测AGE-牛血清白蛋白（BSA）对UVA照射和未照射的皮肤成纤维细胞CatD表达和活性的影响，探讨CatD在光老化皮肤AGE堆积中的作用机制。

　　-------方法

　　原代培养来自儿童包皮成纤维细胞。CCK-8法筛选对成纤维细胞无细胞毒性的AGE-牛血清白蛋白（BSA）浓度。分别以50、100、200mg/LAGE-BSA孵育细胞24h，以未处理细胞作为对照组，采用RT-PCR、Western印迹及荧光法检测AGE-BSA对细胞CatD表达和活性影响。将部分成纤维细胞分为6组，即对照组、AGE-BSA组、BSA组、UVA组、UVA-AGE-BSA组、UVA-BSA组。AGE-BSA组加入最大无细胞毒性浓度AGE-BSA孵育24h，BSA组加入相同浓度BSA孵育24h，后3组除分别接受上述处理外再接受10J/cm2UVA照射。处理结束后，收集细胞mRNA和蛋白，采用RT-PCR、Western印迹及荧光法检测细胞CatD表达和活性。

　　-------结果

　　50、100、200mg/LAGE-BSA对皮肤成纤维细胞增殖活性无显著影响。50mg/L组、100mg/L组、200mg/L组细胞CatDmRNA水平分别为0.267&plusmn;0.007、0.348±0.007、0.418±0.006，CatD蛋白水平分别为1.403±0.181、2.233±0.090、2.477±0.111，CatD活性分别为1.760±0.080、2.330±0.060、2.890±0.080，较相应对照组显著升高（均P<0.05）。AGE-BSA呈剂量依赖性地刺激细胞CatD表达和活性。对照组、UVA组和UVA-AGE-BSA组细胞中CatDmRNA表达水平分别为0.155±0.005、0.480±0.005、0.394±0.008，蛋白表达水平分别为0.920±0.235、2.583±0.199、2.070±0.125，CatD活性分别为1.110±0.040、2.970±0.110、2.560±0.060；UVA组CatDmRNA水平、蛋白表达水平、酶活性均明显高于对照组（P<0.05），但UVA-AGE-BSA组3种指标水平均显著低于UVA组（P<0.05）。

　　-------结论

　　AGE可升高未接受UVA照射的皮肤成纤维细胞CatD表达和活性，但AGE却抑制UVA照射上调的CatD表达和酶活性，这种抑制的机制尚待深入研究。