西达本胺联合姜黄素对人皮肤T细胞淋巴瘤细胞系Hut78的影响及其分子机制

　　西达本胺是我国具有自主知识产权和全新化学结构的选择性组蛋白去乙酰化酶抑制剂，具有高抗癌活性和低毒性。姜黄素是一种从东印度植物姜黄的根茎中分离出的天然黄色颜料，在很多肿瘤细胞系和动物模型中可抑制细胞生长和诱导凋亡。谷晓广等研究了西达本胺联合姜黄素对人皮肤T细胞淋巴瘤细胞（CTCL）系Hut78的增殖抑制和凋亡诱导作用，探讨西达本胺联合姜黄素治疗CTCL的机制。

　　方法

　　分别用不同浓度西达本胺，10μmol/L姜黄素，1.2μmol/L西达本胺联合10μmol/L姜黄素处理Hut78细胞24、48、72h后，采用MTS法检测Hut78细胞的生存率。用0.6、1.2μmol/L西达本胺，10μmol/L姜黄素，1.2μmol/L西达本胺联合10μmol/L姜黄素分别处理Hut78细胞24h，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况及细胞周期，用实时PCR和Western印迹法检测凋亡相关基因Fas、caspase8、NF-κBp65及细胞周期相关基因P21、CDK2、细胞周期蛋白E（cyclinE）mRNA和蛋白的表达。

　　结果

　　西达本胺能明显抑制Hut78细胞的增殖，且呈剂量依赖性（P<0.001）和时间依赖性（P<0.001）。培养48h和72h时，1.2μmol/L西达本胺联合10μmol/L姜黄素对细胞增殖的抑制作用显著强于1.2μmol/L西达本胺及10μmol/L姜黄素（均P<0.001）。流式细胞仪结果显示，联合组的凋亡细胞比例均显著高于0.6、1.2μmol/L西达本胺组和10μmol/L姜黄素组（均P<0.001）。此外，联合组和1.2μmol/L西达本胺组G0/G1期细胞比例明显高于0.6μmol/L西达本胺组和10μmol/L姜黄素组，而其S期细胞比例及G2/M期细胞比例均明显低于0.6μmol/L西达本胺组和10μmol/L姜黄素组（均P<0.05），联合组与1.2μmol/L西达本胺组各细胞周期比例差异均无统计学意义（均P>0.05）。实时PCR结果显示，联合组和1.2μmol/L西达本胺组Fas、caspase8、P21mRNA的表达均明显高于0.6μmol/L西达本胺组和10μmol/L姜黄素组（均P<0.001），而其NF-κBp65、CDK2、cyclinEmRNA的表达均明显低于0.6μmol/L西达本胺组和10μmol/L姜黄素组（均P<0.001）。联合组FasmRNA的表达明显高于1.2μmol/L西达本胺组（P<0.001），而caspase8、P21、NF-κBp65、CDK2、cyclinEmRNA的表达与1.2μmol/L西达本胺组差异无统计学意义（均P>0.05）。Western印迹结果显示，联合组与0.6、1.2μmol/L西达本胺、不加药物的对照组比较，Fas、caspase8、P21蛋白的表达明显增加，而NF-κBp65、CDK2、CyclinE蛋白的表达明显降低，与以上基因mRNA的表达一致。

　　结论

　　西达本胺通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡来抑制CTCL细胞系Hut78生长，联合姜黄素能明显提高这种抑制作用。