兔VX2肝癌模型的建立的综述

　　1VX2瘤株简介

　　在1930年后期，Kidd利用Shope病毒在兔子体内诱发乳头瘤，随后转化成鳞状细胞癌，建立了可以植入兔子的许多部位和器官的VX2瘤种，从而成功地建立了兔子VX2肿瘤动物模型。实验所用瘤株来源于Shope病毒致乳头瘤恶变形成的上皮细胞恶性肿瘤，经过72次传代后正式建株，并可接种到兔肝脏、肾脏、肌肉、肺脏等部位，制成原位肿瘤动物模型。

　　实验一般采取兔VX2肿瘤模型的主要原因是：该肿瘤性质稳定，增殖迅速，短期内即可发生广泛坏死，并形成肝、肺转移，故VX2肿瘤瘤株在大型动物模型的研究上具有很高的应用价值。

　　2动物模型的特点

　　兔肿瘤模型具有制作简便易行，价格相对低廉，实验周期短、成功率高、重复性好、模型性质稳定等特点。兔肝脏的左叶体积明显大于右叶，左肝动脉较粗大，大多数从腹腔动脉直接发出，而右肝动脉较细。同时为了方便操作，避免栓塞材料等进入胆囊动脉引起不必要的并发症。因此，研究VX2肝癌模型最好是将悬液种植于肝左叶。虽其组织形态，生物学特性与原发性肝癌有所不同，而兔长期生存率不高，且兔VX2肝癌模型在短期内即出现明显的液化坏死等均不利于长期研究，但可用作有关肝癌治疗学及肝癌影像学等的相关临床前期研究。

　　3VX2瘤株的制备

　　首先，将VX2冰冻肿瘤细胞按一般细胞培养技术进行复苏后8004/min离心5min，弃去上清液，加入PBS液再离心5min，再弃上清液后加入PBS液并用玻璃棒搅匀。取悬液置于培养皿中培养传代，台盼蓝染色，将培养液调制成1×107/ml活细胞密度。取0.5ml接种于兔后腿外侧肌肉内，2周后可扪后及后腿外侧肌肉内一实质性包块，说明荷瘤兔制作成功。传代一般在2~4周左右进行，4周后瘤体多液化坏死，影响接种质量。在无菌条件下将兔全麻后手术剥离荷瘤兔腿肌肉肿块，切开瘤体后取瘤细胞生长活跃的灰白色鱼肉样组织置于盛有生理盐水(青霉素40万U)4烧瓶中，剔除坏死组织及纤维组织，以便制成肿瘤悬液。用1ml注射器抽取1ml备用。当采用肿瘤组织块直接接种法时则将荷瘤兔体内取出的生长活跃的肿瘤组织用手术剪剪碎至1~2mm3的小块以便后续种植之用。

　　4兔VX2肝癌模型的建立

　　目前兔VX2肝癌模型的建立主要有3种方法：瘤细胞悬液经肝包膜注入法、超声穿刺接种，肿瘤组织块直接接种法。

　　4.1肿瘤组织块直接接各法

　　将免子全麻后无菌条件下逐层开腹，暴露肝脏，以眼科镊于肝左叶中央比较厚处刺存肝组织并形成口小高尔夫球大的“烧瓶”样窦道，将2~3块剪碎的瘤株植入其中，并以明胶海棉碎块埋塞窦口。确认止血后回纳肝脏，逐层关腹。术中还应注意：(1)瘤析制备时要将坏死组织及纤维组织剔除干净，以免影响成功率。(2)注意无菌操作，避免感染所所致接种失败。(3)塞入瘤株碎块后，应以明胶海绵填塞窦口，一来可避免瘤块溢出造成腹腔种植;二则可使瘤株尽可能种植在肝左叶深部，可使瘤灶靠近较大血管支易于获得血供。

　　4.2超声穿刺接种

　　常规肋下B超或CT扫查待接种兔肝脏，明确兔肝位置并确定待接种部位，选定穿刺点、角度、深度。常规消毒铺巾，尖刀挑开穿刺点皮肤(术后瘢痕点可作作为B超或CT监测移植瘤的部位)，用带尖头穿刺针芯穿刺针沿设定的穿刺角度、方向穿入预定肝位置，助手固定好穿刺针，术者拔出针芯，眼科镊夹1块瘤块放入针鞘内，平头穿刺针芯将瘤块推入肝几，重复1~2次。在直视下来回在针鞘内推动平头穿刺针芯，证实瘤块接种于肝脏。如未成功，可再重复上述操作。术后连续3天青霉素40万U+庆大霉素4万U肌注。采用直接穿刺法复制出的VX2兔肝癌模型具有方法简单、成功率高、模型性质稳定的特点。

　　同常规开腹接种法相比具有以下优点：不需开腹，无开腹接种法常伴的出血多、损伤大、术中兔麻醉过浅不易操作，麻醉过深易致意外死亡;术后手术瘢痕影响超声监测等缺点。同悬液注射法相比：形成的肿瘤为孤立结节型而非弥漫性肿瘤，便于进行肝癌的影像学研究，无腹腔种植，并且可根据研究需要调整模型肿瘤在肝的位置。不过，由于兔肝小移动性大且分叶多，故在选兔时一般选择体型较大的兔，为提高穿刺接种成功率，要长度略长于外套针;穿刺时需一定的技巧;先用尖刀挑开拟穿刺处皮肤，再进针。进针要求快，防止瘤块接种于肝叶之间的空隙中。

（实习编辑：庄智伟）