《三维微团培养调节软骨细胞骨架蛋白对成软骨表型的影响》

　　目的 研究软骨细胞骨架蛋白结构改变与成软骨细胞表型改变的关系，初步阐述软骨细胞骨架变化在骨关节炎发病机制中的作用。

　　方法 采用三维微团培养（pellet culture）法培养新西兰兔膝关节软骨细胞，2周后加用秋水仙碱、细胞松弛素 B 及丙烯酰胺分别作用于软骨细胞骨架的微管、肌动蛋白微丝及波形蛋白中间纤丝，继续培养 1 周、3 周后分别从大体形态、组织切片染色、免疫组化染色及 PCR 技术分析对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素 B组及丙烯酰胺组成软骨细胞表型的改变。

　　结果 pellet culture 法培养软骨细胞，2 周后可形成肉眼明显可见的细胞微团组织；加用秋水仙碱、细胞松弛素 B 及丙烯酰胺处理 1 周时各组形成细胞微团大小无明显差别，3 周时对照组大小较其它各组明显；HE 染色显示 1 周时对照组细胞多边形，核仁明显，细胞分布均匀、密集，秋水仙碱组及细胞松弛素 B 组和对照组相比无明显差异，而丙烯酰胺组细胞较少，分散；3 周时对照组细胞圆形，形成类软骨陷窝结构，秋水仙碱组、细胞松弛素 B 组及丙烯酰胺组细胞形态不规则；阿尔新蓝染色显示 1 周时对照组软骨细胞周围深染，基质染色稍浅，秋水仙碱组及细胞松弛素 B 组和对照组相比无明显差异，而丙烯酰胺组软骨细胞周围及基质染色均较浅，3 周时四组染色无明显区别；免疫组化染色显示 1 周、3 周时对照组 COLⅡ深染，COLⅠ淡染，秋水仙碱组及细胞松弛素 B 组和对照组相比无明显差异，而 1 周时丙烯酰胺组 COLⅡ及 COLⅠ染色相差不大，3 周时 COLⅠ染色较深；PCR 检测显示 1 周、3 周时对照组、秋水仙碱组、细胞松弛素 B 组及丙烯酰胺组 COLⅡ、Aggrecan 表达呈下降趋势，而 COLⅠ表达呈上升趋势，对照组和秋水仙碱组、细胞松弛素 B 组相比，差异无统计学意义，对照组和丙烯酰胺组相比，P＜0.05，差异有统计学意义。

　　结论 调节细胞微团中软骨细胞波形蛋白中间纤丝，可使软骨细胞 COLⅡ、Aggrecan 下降，COLⅠ表达上调。