(一)常规实验诊断
1病毒分离与鉴定用棉花拭子采集患者鼻咽部分泌物或含漱液,接种9-11日龄的鸡胚羊膜腔和尿囊腔,分别收尿囊液和羊水,测红细胞凝集活性,如具有活性,可用当前人群中流行的甲3(H3N2),甲1(H1N1)亚型和乙型毒株的抗血清,用红细胞凝集抑制法(HI)进行鉴定。如分离物红细胞凝集活性均不被鉴定血清所抑制,则应考虑它可能为新亚型流感病毒或丙型流感病毒。如果分离物来自3岁以下儿童可先用丙型流感病毒抗血清鉴定之,如来自3岁以上患者就得用火箭电泳或免疫荧光或ELISA或型特异的补体结合试验进行型鉴定;如不具有血凝活性,应将所收获的标本混合后,按同法盲传一代,如再查不到HA活性则弃之。
由于当前刚从人群中分离出的甲型流感病毒具有“O”相特性,用鸡胚难分离到并鸡红细胞不发生凝集,故对它们分离时最好用狗肾传代细胞(MDCKcells),或鸡胚与MDCK细胞并用,查HA活性时用豚鼠或人的“O”型红细胞。
2血清学在同一条件下,同时检查患者急性期(采集于发病后头3天)和恢复期(采集于发病后2-4周)血清,如恢复期抗体滴度比急性期高4倍或以上即可确诊。
测定抗原为当前人群中流行的甲3(H3N2),甲1(H1N1)亚型和乙型毒株。常用的测定方法为:红细胞凝集抑制测定;细胞系统上微量中和试验和单扩溶血测定。
(二)快速诊断法
由于流感潜伏期短,恢复快,测IgM抗体结果不够理想。因此,通过血清抗体测定来达到快速诊断基本上是不可能的。只能通过直接从患者采集的标本中测定病毒颗粒或病毒特异的蛋白亚单位或核酸。常用的方法有ELISA法,间接免疫荧光测定法,DirectigenFluA和RT-PCR法。
(三)群体快速诊断
这种情况在处理疫情时常遇到,主要是通过查抗体来进行判断。
1到一个正在疑似流感流行的地区或单位,可遇到急性期和恢复期病人。这时可采集急性期(正在发病者)和恢复期(得病后已痊愈者)的血清各10-20份,但两组要注意年龄,既往史等均衡。同时测定其对当前甲型和乙型流行株的血抑抗体,也可测补体结合抗体。如恢复期病人血清抗体几何均数≥4倍于急性期病人的血清抗体几何均数,就可认为该地区流感在流行。如高不出4倍,需进行t测定。
2到达某地区或单位时,流感流行已过去,这时可采集曾经发病过和未发病的血清各10-20份,两组同样要注意各方面的均衡。测定和判断方法可同上。但也可进行型特异的补体结合实验,如发过病的多数补体结合抗体为≥1:16,而多数未发病的均<1:16,就可认为某单位或某地区近期内发生过流感流行。
由于近来已进入信息社会,交通极方便,常常到达疫区时,类流感爆发刚开始。这时就得用常规诊断或一般快速诊断法加以判断。
(实习编辑:张宝婷)
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