蛋白质浓度测定概述
蛋白质浓度测定是利用化学或物理方法测定蛋白质的浓度,是往往用于计算纯化方法的回收率的重要方法。 双缩脲法 双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,硫铵不干扰显色, Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。双缩脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白质溶液测定。
蛋白质浓度测定正常值
人体正常值一般是60一80g/L。
蛋白质浓度测定临床意义
异常结果
1、 双缩脲法:双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,硫铵不干扰显色, Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。双缩脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白质溶液测定。
2、Lowry法:Cu+与蛋白质在碱性溶液中形成络合物,然后这个络合物还原磷钼磷-磷钨酸试剂(福林-酚试剂),结果得到深蓝色物。此法比双缩脲法灵敏得多,适合于测定20mg/L~400mg/L含量的蛋白质溶液。
3、紫外吸收法:大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收,这是由于蛋白质中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用于测定0.1~0.5mg/ml含量的蛋白质溶液。
需要检查的人群
有软弱无力疲乏、困倦,皮肤、黏膜苍白,注意力不集中的人群。
蛋白质浓度测定检查方法
受试者静脉采血,及时分离血清后测定。绘制标准曲线:取96孔酶标板,加入试剂。试剂加完后,准确吸取20μl样品溶液于酶标孔中,加入BCA试剂200μl,轻摇,于37℃保温30-60min,冷却至室温后,以空白为对照,在酶标仪上590nm处比色,以牛血清白蛋白含量为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘制标准曲线。以标准曲线空白为对照,根据样品的吸光值从标准曲线上查出样品的蛋白质含量。
蛋白质浓度测定注意事项
检查前禁忌:检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。体检前一天的晚八时以后,应禁食。
检查时要求:抽血时应放松心情,避免因恐惧造成血管的收缩、增加采血的困难。测定中,蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上,实验证明此复合物的吸附量是可以忽略的。测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。