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血清蛋白电泳(SPE)

血清蛋白电泳(SPE)概述

蛋白质在碱性条件下带不同量的负电荷,在电场中由阴极向阳极泳动。醋酸纤维薄膜和琼脂糖凝胶是目前最常采用的两大介质。由于白蛋白等电点的差异,电泳后由正极到负极可分为,白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白五个区带,血清蛋白电泳初步了解血清白蛋白中主要组分的一种技术方法,通过血清蛋白电泳来反映肝细胞损伤程度和病变范围。也可用于反映其他疾病如肾脏疾病,风湿免疫系统疾病等。

血清蛋白电泳(SPE)正常值

  • 1.琼脂糖法: 白蛋白48%~64% α1-球蛋白2.5%~5.4% α2-球蛋白8.3%~l4% β-球蛋白8.7%~l5% γ-球蛋白12%~l5% 2.醋酸纤维薄膜法: 白蛋白57%~68% α1-球蛋白0.8%~5.7% α2-球蛋白4.9%~11.2% β-球蛋白7.0%~l3% γ-球蛋白9.8%~18.2%

血清蛋白电泳(SPE)临床意义

  • 1、白蛋白减少见于慢性肝炎、肝硬化、肝癌等。
    2、α1球蛋白(糖蛋白)增高见于原发性肝癌。在重型肝炎、肝硬化、肝昏迷时则减少,与白蛋白呈正相关。肝病时测定α1球蛋白对判断肝炎的严重程度和预后有参考价值。一般情况下,α1球蛋白增加示病情较轻,α1球蛋白减少则提示病情较重,在严重肝功能衰竭时,其血清含量可显著降低。
    3、α2球蛋白病毒性肝炎初期无明显变化,一周后逐渐增加,亚急性肝炎和急性肝坏死、失代偿期肝硬化则减少。
    4、β球蛋白增高见于脂肪肝、高脂血症、肾病综合征、糖尿病合并高胆固醇血症、梗阻性黄疸、恶性肿瘤。在胆汁淤积性肝病时其含量升高,与α2球蛋白升高相平行。降低于见于急、慢性肝炎,肝硬化,尤以失代偿期肝硬化和坏死肝硬化下降最为显著。
    5、 γ球蛋白增高见于慢性肝炎、肝硬化、肝胆疾患。典型肝硬化尚可见β和γ带相融合,形成β-γ桥。肝病患者γ球蛋白的变化可反映病情的严重程度。随病情好转,其含量可逐渐降至正常,如一直在高水平持续不降,提示病情严重,预后不良,并有向慢性肝炎及肝硬化发展的趋势。此外,感染、血吸虫病、多发性骨髓瘤、结缔组织病等也可升高。降低见于丙种球蛋白缺乏症、部分化疗患者等。
    另外,多发性骨髓瘤在β球蛋白区带与γ球蛋白区带之间常出现M球蛋白带;双白蛋白血症可见双条白蛋白区带。

血清蛋白电泳(SPE)检查方法

  • 1、将缓冲液加入电泳槽内,调节两侧槽内的缓冲液,使其处于同一平面。
    2、醋酸纤维素薄膜的准备:取醋酸纤维素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(负极侧)1.5cm处用铅笔轻划一横线,做点样标记。编号,并标明正、负极后,将薄膜置于巴比妥-巴比妥钠缓冲液中浸泡,待充分浸透后(一般为20min)取出,夹于洁净滤纸中间吸去多余的缓冲液。
    3、将醋酸纤维素薄膜毛面向上贴于电泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取无溶血血清3~5μl于横线处沿横线加样,样品应与薄膜的边缘保持一定的距离,以免电泳图谱中的蛋白区带变形,待血清渗入薄膜后,反转薄膜,使光面朝上,平直地贴于电泳槽支架上,用双层滤纸或四层纱布将薄膜的两端与缓冲液连通,稍待片刻。
    4、接通电源,注意醋酸纤维素薄膜上的正、负极,切勿接错。电压90~150v,电流0.4~0.6mA/cm(不同的电泳仪所需电压,电流可能不同,应灵活掌握),夏季通电45min,冬季通电时间稍长,约为60min,电泳区带展开约25~35mm即可。
    5、染色:通电完毕,取下薄膜直接浸于丽春红S染液或氨基黑10B染色液中,染色5~10min(以白蛋白区带染透为止),然后在漂洗液中漂去剩余染料,直至背景无色为止。
    6、定量:
    ①比色法:将漂洗的薄膜吸干,剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中,在白蛋白管中加0.4mol/L氢氧化钠6ml(计算时吸光度乘以2),其余各管加3ml,振摇数次,置37℃水箱20min使其色泽浸出。氨基黑10B染色用分光光度计在620nm处读取各管吸光度,然后计算出各管的含量(同时做空白管对照)。
    丽春红S染色时浸出液用0.1mol/L氢氧化钠,加入量同上法。10min后,白蛋白管内加400ml/L醋酸0.6ml(计算吸光度时乘以2),其余各管加0.3ml,以中和部分氢氧化钠,使色泽加深,必要时离心,取上清液用分光光度计在520nm处读取各管的吸光度(同时作空白对照),然后计算各自的含量。
    ②光密度计扫描法:A.透明:吸去薄膜上的漂洗液(为防止透明液被稀释影响透明结果),将薄膜浸入透明液中2~3min,然后取出,以滚动的方式平贴于洁净无划痕的载物玻璃片上(切勿产生气泡),将此玻片竖立片刻,除去多余透明液后,置于恒温90℃至100℃的烘箱内,烘烤10~15min,取出冷却至室温,用此法透明的各蛋白区带鲜明,薄膜平整,可供直接扫描和永久保存(用氢萘或液体石蜡透明,应将漂洗过的薄膜烘干后进行透明,此法透明的薄膜不能存久,且易发生皱折)。B.扫描定量:将已透明的薄膜放入全自动光密度计或其他光密度计暗箱内,进行扫描分析。 

血清蛋白电泳(SPE)注意事项

  • 1、空腹12小时,抽取静脉血化验,标本一定要新鲜血液。
    2、化验前要告知医生近期所服用的药物以及近期的生理改变。
    3、下列情况可出现生理性升高:
    (1)α1-球蛋白升高可见于妊娠6个月后。
    (2)α2-球蛋白升高可见于出生1~6个月的婴儿,妊娠4~6个月中度升高,7~9个月显著升高。
    (3)β-球蛋白升高见于婴儿出生后、妊娠4~6个月。
    (4)γ-球蛋白升高见于预防接种免疫疫苗后。 

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