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混合淋巴细胞培养试验

混合淋巴细胞培养试验概述

混合淋巴细胞培养试验(mixedlymphocyteculture,MLC)是一种测定受体和供体主要组织相容性抗原(HLA抗原)相容程度的试验方法,常用于器官移植前的组织配型。混合淋巴细胞培养将供者与受者的淋巴细胞做双向混合培养,或者灭活供者的淋巴细胞做向混合培养,细胞反应的程度与供-受者相容的程度呈负相关的试验。 

混合淋巴细胞培养试验正常值

  • 形态计数法转化率<10%。
    同位素计数法比较cpm得出P>0.05。 

混合淋巴细胞培养试验临床意义

  • 异常结果:
    肾移植时,活体供肾者的转化率应<10%;尸体供肾者的转化率应为>10%。只能在同一批实验中选用低反应配组。淋巴细胞转化率10%者为不同两个体间的组织是相容的。淋巴细胞混合培养试验用以检测患者的免疫状态。T淋巴细胞数减少时,转化率也降低。可作为器官和骨髓移植的配型方法之一,用来选择合适的供体。如转化率高为供受者分歧用。转化率低,移植后的成功率高。
    需要检测人群:
    免疫力受损或者缺失的人群。 

混合淋巴细胞培养试验检查方法

  • 1、供体淋巴细胞的制备:
    新鲜外周静脉血按1∶1比例加在装有比重为1.077的淋巴细胞分离液的离心管中,轻稳加在液面上. 2000 r/min离心20 min,吸取中间雾状淋巴细胞层. 生理盐水洗涤2次. 台盼蓝染色,计数板计数. 调整细胞密度为2×109/L,分成3管,各自离心,留取沉淀. 每管中加入250 μL丝裂霉素(终浓度50 mg/L)和1.75 mL生理盐水,37℃水浴40 min, 生理盐水离心洗涤2次. 用含100 mL/L胎牛血清的RPMI 1640液调整细胞密度为1×1010/L.加入抗体封闭抗原.标记为D。
    2、受体淋巴细胞的制备:
    新鲜外周静脉血按1∶1比例加在装有比重为1.077的淋巴细胞分离液的离心管中,轻稳加在液面上. 2000 r/min离心20 min,吸取中间雾状淋巴细胞层. 生理盐水洗涤2次. 用含120 mL/L胎牛血清的RPMI 1640培养液调整细胞密度为1×1010/L. 标记为R。
    3、混合淋巴细胞培养:
    将已制备好的R和D按如下分组加入96孔板,置37℃,50 mL/L CO2孵箱中培养24 h. A组:R 50 μL+D 50 μL;B组:R 50 μL+D 50 μL+IL?2纯化中和mAb 15 μL;C组:R 50 μL+IL?2纯化中和mAb 15 μL;D组:R 50 μL. 每组3个复孔,空白对照组为RPMI 1640培养液100 μL。 

混合淋巴细胞培养试验注意事项

  • 检查时:本试验可作为器官移植筛选供体的方法,转化率低者移植成功率高,转化率高者成功率低。 

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